全血DNA如何提取

如题所述

第1个回答  2022-07-23
1请自行准备:无水乙醇、异丙醇、1.5ml离心管,20ml离心管或PP瓶。

2取出洗涤液,每6mL洗涤液加入14mL无水乙醇,混匀,可用于20例样本的DNA提取(若提取样本较多,可按比例增加试剂)。

3取1.5ml灭菌离心管1支,加入200 μL裂解液和20μL消化液,再加入200ul已经解冻或新鲜的血液(冷藏血液需先轻振混匀),振荡混匀2分钟,56℃水浴6分钟。

      注意: 本试剂盒提取血量不要超过200ul,如血液量较多,请使用BIOG中量血液DNA提取试剂盒。如果提取的血液为鸟类、禽类的血

液,因有核红细胞较多,提取血液量不超过15ul。如提取血凝块,可先取5x5x5mm大小的凝血块放入1.5ml离心管,用枪头反复敲打

挤压至1x1x1mm大小,再加入200 μL裂解液,震荡混匀1分钟,56℃水浴20分钟。

4取出离心管,放置冷却到室温,5000rpm离心1分钟。加入300μL异丙醇(自备),轻轻颠倒混匀8次,如有半透明悬浮物,不影响DNA的提取与后续实验。

5将吸附柱放入收集管内,将上述溶液转入吸附柱内,静置1分钟,12,000 rpm离心1分钟,弃收集管内废液。

6将吸附柱放回收集管内,加500 μL洗涤液至吸附柱内,静置1分钟,12,000 rpm离心1分钟,弃收集管内废液。

7将吸附柱放回收集管内,加500 μL洗涤液至吸附柱内,12,000 rpm 离心1分钟,弃收集管内废液。

8将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm离心1分钟,离去残留的洗涤液。

9.取出吸附柱,放入新的1.5 mL 离心管内,向离心柱吸附膜上加入50 μL洗脱液,静置1分钟,12,000 rpm离心1分钟,收集DNA溶液。提取得到的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。
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