细胞冻存步骤是什么?

如题所述

第1个回答  2022-12-11

仪器1. 净化工作台2. 离心机3. 恒温水浴箱4. 冰箱(4℃、-20℃、-70℃)5. 倒置相差显微镜6. 培养箱7. 液氮冰箱

玻璃器皿1. 吸管(弯头、直头)2. 培养瓶3. 玻璃瓶(250ml、100ml)4. 废液缸。

塑料器皿1. 吸头2. 枪头3. 胶塞4. 移液管(10ml)5. 15ml离心管6. 冻存管(1~2ml)。

其他物品1. 微量加样枪2. 红血球计数板3. 记号笔4. 医用橡皮膏5. 移液枪(五)试剂1. D-Hanks液2. 小牛血清3. 培养液4. 双抗(青霉素、链霉素)5. 胰蛋白酶(0.08%)6. 1NHCl7. 7.4%NaHCO38. DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油。

细胞冻存1. 配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的冻存培养液;

2. 取对数生长期的细胞,用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来,悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中;

3. 离心1000rpm,5min;

4. 去除胰蛋白酶及旧的培养液,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml~1×107/ml;

5. 将细胞分装入冻存管中,每管1~1.5 ml;

6. 在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者;

7. 冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/ min;当温度达-25℃以下时,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时,则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内。

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