欢迎来到[qPCR 专栏]，我们深入探讨相对定量的奥秘（5）——内参基因的选择与应用。在前几篇文章中，我们已介绍了入门术语（1），探针法与染料法的差异（2），Taqman探针的选择（3）以及绝对定量的实践（4）。今天，我们将聚焦于相对定量中不可或缺的角色——内参基因，它们是如何为我们揭示基因表达的相对变化的。
相对定量，一个看似简单的概念，其实包含了两个关键元素：“相对”与“定量”。这里的“相对”是指我们通常所说的内参基因，即稳定的管家基因。它们的重要性在于提供实验中的基准，帮助我们校正误差，确保实验结果的可靠性。那么，如何选择和验证合适的内参基因呢？请跟随小编的脚步，一探究竟。
在样本间比较目的基因表达时，内参基因的作用不言而喻。通过比较与对照样本中目的基因的Ct值，内参基因作为“校准器”，帮助我们消除上样量和操作误差的影响，得到准确的相对表达量。理想的内参基因应具有高度稳定性和广泛表达性，如GAPDH、β-actin、18S rRNA等，它们在各种细胞和组织中都能保持相对恒定的表达。
理想内参基因的选择并非一成不变，需要根据实验目标和样本特性灵活选择。在没有现成推荐时，可以参考北京基因组所生命与健康大数据中心的qPCR内参基因知识库，里面汇集了大量实验条件下验证过的基因供参考。比如，ICG公布的10个常用体内内参基因。
在选择内参基因后，确保其稳定性的验证至关重要。常用工具如geNorm、BestKeeper、NormFinder和RefGenes可以帮助我们评估候选基因的稳定性。首先，可以选取多个候选基因，然后通过qPCR实验进行深入比较，关注每个基因的Ct值平均值和标准偏差，以此来确定最稳定、最适合实验需求的内参基因。