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荧光定量引物退火温度
第一次做
荧光定量
PCR,内参基因能够跑出来,而且溶解曲线也比较好,但是...
答:
结果至关重要! 可以用普通PCR确定你的
引物
扩增效率如何? 模板可以选取一个阳性质粒当模板。3) Realtime 体系配置出问题:好好想一下,该加的东西都加了没?模板、染料、taq酶、等。并且各个试剂的量一定要确定没问题!4) 程序设置:仪器的程序设置,plate的编排、
退火温度
、等等。祝你好运!!!
普通pcr
引物
设计和
荧光定量
pcr引物设计的区别
答:
一、方法不同 1、普通pcr
引物
设计:引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。2、
荧光定量
pcr引物设计:通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,标记跟踪PCR产物进行实时监测反应,利用与之相适应的软件对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度 二、原理不同 1、普通pcr引物设计:为了找到一对合适的...
实时
定量
PCR的绘制溶解曲线应该从多少度开始升温
答:
如果扩增产物只有目标序列的话就应该只有一个峰的。1.简单的说来,溶解曲线就是在采用
荧光
染料法进行实时
定量
PCR时采用的一种分析手段。当体系的
温度
逐渐升高的时候,体系中的PCR产物慢慢的由双链变成单链,这是一个逐渐变化的过程。由于荧光染料能插入到双链DNA中而发光,单链不发光,因此可以看到荧光...
如何稀释实时
荧光定量
PCR的
引物
?
答:
100pmol/ul= 100umol/L= 100uM (Standard stock concentration of PCR Oligos)V= 摩尔体积/摩尔浓度= 9.96nmol/100uM= 9.96nmol/ (100umol/L)= 9.96nmol/ (100000nmol/L)= 0.0000996L= 99.6ul Hence, add 99.6ul Rnase-free ddH2O.对任意PCR
引物
,正确加水体积应为V(ul)=N (nmol...
怎样用Primer5设计
荧光定量
PCR
引物
,怎样设置各种参数,求大神指点_百度...
答:
选取 目标片段长度在80-250bp的
引物
,在回头BLAST,特异性良好的话就可以了,一般我会多设计几个,选取最好的那个~
荧光定量引物
放久了有影响吗
答:
荧光定量引物
放久了有影响。荧光定量引物放久了会有一定的影响,原因是引物本身会随着时间的推移而失去活性,导致实验结果受到影响。因此,建议在实验之前检查引物的活性,以便获得最佳实验结果。荧光定量引物是一种用于定量PCR实验的特殊引物。它包含一对同源引物,一个用于检测模板DNA的探针,以及一个荧光...
DNA测序的测序技术
答:
对于每个
引物
/模板组合都必须选择最佳
退火温度
。下列程序一般能读出从引物开始350碱基的长度。7. 热循环程序完成后,在每个小管内加入3 μlDNA测序终止溶液,在微量离心机中略一旋转,终止反应。【注意】(1)测序所用模板DNA的量一般按下面要求加入:模板种类/长度 模板量200 bp(PCR产物):16 ng(120 fmol)3000~5 ...
科普讲堂|实时
荧光定量
PCR检测方法
答:
淬灭染料
引物
法则是采用荧光标记的引物进行扩增,标记基团直接掺入扩增产物中,实现荧光信号的检测。此法特异性高,能减少背景荧光和假阳性,适合进行多重PCR扩增,但原料成本较高。实时荧光PCR仪整合了热循环仪、光学系统和数据分析软件,提供了一站式解决方案,使实验结果直观展示。实时
荧光定量
PCR技术因其...
实时
荧光定量
PCR
答:
实时
荧光定量
PCR ,简称 RT-QPCR, 属于 Q-PCR 的一种,目前该技术已得到广泛应用,如:扩增特异性分析、基因定量分析、基因分型、 SNP 分析等。荧光定量 PCR 常用的方法是 DNA 结合染料 SYBR GreenⅠ的非特异性方法。 SYBR Green I 是一种结合于所有 dsDNA 双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的荧光染料, 可与所...
急求!!DNA测序的问题
答:
对于每个
引物
/模板组合都必须选择最佳
退火温度
。下列程序一般能读出从引物开始350碱基的长度。 7. 热循环程序完成后,在每个小管内加入3μl DNA测序终止溶液,在微量离心机中略一旋转,终止反应。 [注意] 1、测序所用模板DNA的量一般按下面要求加入: 模板种类/长度 模板量 200bp (PCR产物) 16ng(120fmol) 3000-...
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