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大肠杆菌转化方法有哪些
大肠杆菌
感受态细胞DNA
转化
,为什么没有克隆菌生长
答:
是不是没有转进去,没有抗性,都死掉了
质粒
转化
用哪种
大肠杆菌
答:
要看你是做克隆还是做表达,克隆的话DH5a最常用,原核表达DE3(也叫BL21)最常用。
为什么
转化
的和未转化的DH5a
大肠杆菌
都能在LB培养基上生长
答:
最有可能是Amp+失效了,我之前也是这种情况,如果你的Amp+事新的,也可能是在加入Amp+时液体LB培养基的温度太高了导致Amp+失活
转化
和未转化的
大肠杆菌
在LB平板上的生长结果如何?
答:
如果没有抗生素的话都一样的长 如果有抗生素的话未
转化
的不长
使用pcDNA3.1载体
转化大肠杆菌
后,如何进行筛选?
答:
空载体吗?不用筛选 如果你操作没问题的话,
转化
率100% ,不过还是要验证的。提质粒做酶切验证了,分别做个单酶切和双酶切。单酶切用来判断质粒的大小,双酶切用来看是否就是该质粒,不过尽量选位点相距较远的酶切位点,100bp以下的小片断电泳很难观察到。
作为受体细胞的
大肠杆菌
不经过处理会怎样?
答:
在基因工程上,,不处理的细菌不便操作,成功率也很小。。而作为受体,不处理,物质。比如说质粒,重组基因进不去的
用氯化钙法将质粒DNA
转化
入
大肠杆菌
实验中,转化成功的关键因素
有哪些
...
答:
1.细菌的生长状态和密度:OD006=0.3~0.5 细菌出于对数期或者对数前期 2.质粒DNA:数量:质粒DNA不超过感受态细胞体积的5 大小:分子量越大
转化
效率越低,超过30Kb的质粒DNA很难转化成功 构型:超螺旋的DNA具有较高的转化效率,重组DNA效率低一些,环状DNA相比线性DNA转化效率高一些 3.所用试剂纯度...
大肠杆菌
感受态细胞制备时的CaCl2浓度到底是多少呢
答:
大肠杆菌
感受态细胞制备时的cacl2浓度到底是多少 (1)质粒dna的质量和浓度:用于
转化
的质粒dna应主要是超螺旋态的,转化率与外源dna的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源dna的量过多或体积过大时,则会使转化率下降。一般地,dna溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5%,1ng的cccdna即可使50ul的...
做
大肠杆菌
感受态
转化
,培养后不管阴性阳性都长菌的原因除了抗生素失效...
答:
如果是药敏试验,很可能是耐药或药的浓度不够,您的题问有点不太懂,我的回答请参考。
测序前为什么
转化大肠杆菌
感受态细胞,挑选阳性单克隆
答:
为了得到质粒啊
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