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western胶浓度的选择
有人有
western
blot的Tris-乙酸
胶的
配方吗?还有相关电泳液的配方?急...
答:
三、配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离
胶
所用溶液 表1.配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液成分 配制不同体积和
浓度
凝胶所需各成分的体积/mL 5 10 15 20 25 30 40 50 10 %胶 水 1.9 4.0 5.9 7.9 9.9 11.9 15.9 19.8 30 %丙烯酰胺混合液 1.7 3.3 5.0...
SDS-PAGE的主要用途,以及不同的凝
胶浓 度
在实际应用中的意义。
答:
主要用于分离蛋白质或者核酸,不同浓度的分辨率不一样,比如一定高
浓度的胶
可以分离质量分数为1000和1100的,而浓度降低后就难以实现1000与1100的分离。化学聚合以过硫酸铵(APS)为催化剂,以四甲基乙二胺(TEMED)为加速剂。在聚合过程中,TEMED催化过硫酸铵产生自由基,后者引发丙烯酰胺单体聚合,同时甲...
Western
blot实验需要准备什么试剂和耗材
答:
- 减去空白对照的吸光度,绘制标准曲线,并计算样本蛋白浓度。3. 蛋白电泳 - 加热样品至100°C使蛋白变性。- 冰上骤冷样品,然后直接上样至SDS-PAGE胶。- 电泳至染料接近胶底部,停止电泳。4. SDS-PAGE凝胶电泳 -
选择
合适的分离
胶浓度
,准备凝胶。- 配制浓缩胶并组装凝胶。- 上样并电泳,注意调节...
western
蛋白上样量计算
答:
6.上样的总量是一定的,可以是30ug,也可以是50ug,这个值可以通过曝光后条带的颜色深浅来改变总量的多少。上样体积就是上样总量÷上样
浓度
,这样就算出来每组样品需要加多少ul的上样体积跑
胶
啦。还有一点要注意的是,如果样品的浓度很低,测出来的体积就会大,因为一个梳子孔最多能注入25ul,尽量不...
生物科研实战——
Western
blot
答:
和重新跑一个SDS-PAGE
胶
相比,不仅省时省力,而且可以消除重新上样而带来的误差,使可比性更强。(1)将显影完的PVDF膜置于汉恒生物一抗二抗去除液中漂洗10min,室温摇床 (2)弃除一抗二抗去除液并吸尽残余液体加入TBST漂洗3次,每次5min (3)Strip完成后可再次进行封闭、一抗二抗孵育等
Western
...
Western
Blot基本原理及步骤
答:
蛋白质印迹法是由瑞士米歇尔弗雷德里希生物研究所(Friedrich Miescher Institute)的Harry Towbin在1979年提出的。在尼尔·伯奈特(Neal Burnette)于1981年所著的《分析生物化学》(Analytical Biochemistry)中首次被称为
Western
Blot。1、蛋白样品的制备 2、配胶 根据蛋白的分子质量
选择
百分比不同的
胶
。(1)...
western
blot 8%和12%的胶能不能一起跑
答:
可以~两板胶一个电泳槽~前沿跑出的距离合适即可~
western
里的AP是什么
答:
过硫酸铵,配
胶
过程中的一种催化剂,通常配成10%的
浓度
使用,但是容易变质,导致胶不能凝固
western
-blot实验步骤
答:
(1)我们推荐在
Western
实验中
选用
PVDF膜。硝酸纤维素膜(NC膜)也可以使用,但硝酸纤维素膜比较脆,在操作过程中特别是用镊子夹取等过程中容易裂开。膜的使用请参考生产商的推荐使用步骤。通常如果使用Bio-Rad的标准湿式转膜装置,可以设定转膜电流为300-400mA,转膜时间为30-60分钟。也可以在15-20mA转膜...
western
浓缩胶出问题有什么结果
答:
浓缩胶的作用是有堆积作用,凝
胶浓度
较小,孔径较大,把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩
胶选
pH6.8的TRIS/HCL缓冲液,电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后,HCL解离成氯离子,甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷,因此一起向正...
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