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western胶配方
有人有
western
blot的Tris-乙酸胶的
配方
吗?还有相关电泳液的配方?急...
答:
2g)SDS溶于去离子水中,定容至100mL(20mL),加热至68℃助溶。E液——10%过硫酸铵:5g(0.5g)过硫酸铵,溶于50mL(5mL)去离子水中;现配现用或分装至0.5mL离心管中冷冻备用。F液——TEMED(N-N-N`-N`-四甲基乙二胺)原液,室温保存。三、
配制
Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离
胶
所用溶...
Western
Blot 即用型溶液
答:
以1000ml水为基,溶解NaCl、KCl、Na2HPO4.12H2O和KH2PO4,精确调整至pH 7.4,完成定容。2. 三去污裂解液 这款关键试剂包含Tris、叠氮钠、SDS、Aprotinin、NP-40和去氧胆酸钠,具体比例请参考详细说明,溶解后确保无菌。3. SDS加样缓冲液 1×:50mmol/L Tris、2% SDS、0.1%溴酚兰,10%甘油 ...
western
blot实验步骤
答:
western
blot实验操作步骤如下:1. 准备样品 1)制冰,准备冰盒。2)
配制
细胞裂解液:根据细胞数量确定所需裂解液:50ul/六孔板一孔 。裂解液
配方
:100ul碧云天裂解液+1ul蛋白酶抑制剂混合物+1ul PMSF 3)按实验需要准备好细胞:去掉培养基,1×PBS洗3次(去掉培养基中的血清),每个孔(6孔板)加...
western
8%分离
胶配方
含sds吗
答:
不过一般都是用SDS PAGE的胶去做
western
,所以western 8%分离
胶配方
一般是含sds的
Western
Blot基本原理及步骤
答:
(6)凝胶:静置30~60min。(7)制备积层胶:
按配方先向50ml离心管中加入ddH2O、30%丙烯酰胺制胶液、Tris-Hcl-6.8,涡旋使其充分混匀
。再依次加入10%SDS、AP液(0.1g APS粉末+1ml ddH2O)、TEMED,再次涡旋使其充分混匀。(8)插梳子:弃胶板中的无水乙醇,注入积层胶,迅速垂直插入梳子。...
凝胶迁移实验(EMSA) 的原理及实验方案详解
答:
b. 按照如下
配方配制
20ml 4%的聚丙烯酰胺凝胶(注意:使用29:1等不同比例的Acr/Bis对结果影响不大)。 注意:此实验中需去除SDS变性剂 c. 按照上述顺序依次加入各种试剂,加入TEMED前先混匀,加入TEMED后立即混匀,并马上加入到制
胶
的模具中。避免产生气泡,并加上梳齿。如果发现非常容易形成气泡,可以把一块制胶的玻...
大分子蛋白 150KD
western
有什么窍门
答:
大分子量本身就不易转上,建议你用预染marker,电泳时观察条带分离程度;转膜时观察是否从胶上转至膜上,此时,可同时考染胶,看残留在胶上的蛋白量多少,如果残留很多,则需要更改条件及缓冲液
配方
;若残留较少,说明电泳及转膜操作ok,考虑接下来几个步骤的问题。
western
步骤很多,建议一步一步确定...
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