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hrp标记的方法
Elisa
方法
中的竞争法与夹心法的区别
答:
1、检测范围不同 竞争法一般用于检测无法同时与两种抗体结合的小分子抗原;夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。2、检测原理不同 竞争法的检测原理为:受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,因此结合于固相的酶标抗原量与受检...
辣根过氧化物酶(
HRP
)如何配制母液,母液如何保存?
答:
2. 制备好的储备液应当分装保存在冰箱中,以延长其使用寿命。3. 在使用储备液时,应当按照需要的浓度进行稀释,并避免长时间暴露在空气中,以免影响其活性。4. 避免使用过期的储备液,否则会影响到实验结果。总之,制备和保存
HRP
母液
的方法
需要遵循一定的步骤和注意事项,以确保酶的活性和实验结果的准确...
western blotting 的过程和原理
答:
现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色,体同水平和实验条件的是用第一种
方法
,目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行,操作也比较简单,原理如下(二抗用
HRP标记
):反应底物为过氧化物+鲁米诺,如遇到HRP,即发光,可使胶片曝光,就可洗出条带。二、操作步骤:(一)配胶1、注意一定要将玻璃板...
求助:什么是FITC 和PE萤光
标记
答:
这四个不是一码事,HRP和AP是酶,二抗上挂了酶,要给相应的底物才能显色,显色
方式
可以通过发荧光也可以不发荧光(例如给予ECL底物,其中的H2O2和鲁米诺在
HRP的
作用下,能在黑暗中发出荧光;也可以给予双氧水和DAB,反应产生棕色不溶于水的物质。
小分子量蛋白显影
答:
western显色
的方法
主要有以下几种:i. 放射自显影 ii. 底物化学发光ECL iii. 底物荧光ECF iv. 底物DAB呈色 现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色,体同水平和实验条件的是用第一种方法,目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行,操作也比较简单,原理如下(二抗用
HRP标记
)...
免疫印记检测法
答:
免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(Western blotting),是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白
的方法
。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现已成为蛋白分析的一种常规...
...免法,胶体金,凝集法,免疫荧光,比浊法这些
方法
学的利弊,
答:
免疫胶体金技术的
标记
物为胶体金,,是由金盐被还原成原金后形成的金颗粒悬液,胶体金颗粒大小多在1—100nm。3、检测所需仪器或
方法
不同。酶免疫技术通过加酶的底物显色,然后通过酶标检测仪比色来进行检测;放射免疫技术是采用液体闪烁计数仪、晶体闪烁计数仪或X胶片来进行免疫检测;免疫荧光技术则是...
ELISA法检测抗原的双抗体夹心法的一些困惑
答:
我也问过这个问题。听别人给我解释,说可以直接
标记
在一抗上然后加底物显色,但是那样的话,放大效果没有加二抗的好。
在WB中心肌细胞蛋白应该用什么做内参
答:
在Western Blotting实验过程中使用内参
的方法
通常有一下三种。第一种是超级简便的标记内参使用法,只要在二抗孵育时加入
HRP标记
内参抗体,按照正常操作即可;第二种是普通内参,当目的蛋白的分子量大小与选用的内参蛋白分子量相差不大时,可以先进行目的蛋白的抗体温育显色和检测,然后使用Strip缓冲液洗掉膜上的抗体,重新进行...
溶液稀释计算?
答:
加入0.1ul
HRP
,搅拌15分钟,再加入0.1ul H2O2,搅拌15分钟,最后加入dNTPs和TdR,继续搅拌30分钟。将反应混合物倒入烧杯中,待烧杯中混合物沉淀至均匀色时,进行分液。将得到的2ml溶液倒入4ml的模板中,进行扩增。3、根据题目描述,需要免疫4只小鼠,每只小鼠需要50 ug的抗原,抗原浓度为1.5 mg/ml,...
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