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dna聚合酶切刻的原理
什么
是
切刻
平移?谢谢!
答:
英文称为nick translation,是指一个具有切口
的DNA
分子受到DNA pol I 这样的具有5‘到3’外切酶活性以及5’端到3‘端聚合酶活性的酶的作用,
聚合酶的
5‘外切酶活性能从切口的5’端水解DNA链,同时其聚合活性在切口的3‘端延伸DNA链,结果导致切口位置从5’端向3‘端平移。这种缺刻平移的作用主要是对...
原核生物
DNA聚合酶的
简单介绍
答:
5’核酸外切酶活性能使切刻平移(nick translation),聚合酶活性能使缺口填补(gap fill-in)
。3‘核酸外切酶活性与5’核酸外切酶活性的比较 前者作用于单链,作用方向3‘到5’,与聚合酶活性紧密结合,相互影响;后者作用于双链,作用方向5‘到3’,与聚合酶活性无关,可同时进行。DNA pol I 的主要...
聚合酶
与连接酶的区别
答:
聚合酶
用于
DNA
或者RNA的连续合成,它需要模板,按照碱基互补配对的原则合成DNA/RNA链。连接酶仅仅是将产生
切刻
(nick)的两段DNA链重新连接起来。注意,切刻只是两个核糖的磷酸二酯键断了,不同于切口(gap),后者存在核糖核苷酸的缺失
基因工程中主要的工具
酶
有哪几种,它们的作用
是什么
答:
1、DNA限制性内切酶 生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶
。它是可以将外来的DNA切断的酶,即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力,但对自己的DNA却无损害作用,这样可以保护细胞原有的遗传信息;2、连接酶 它是一种封闭DNA链上缺口酶,借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-...
全基因合成方法
答:
oligos靠3'末端互补序列相互退火,形成带有gaps的双链产物,再由
DNA聚合酶
补齐gaps,形成带有
切刻的
DNA双链,这种产物经过Taq DNA Ligase链接形成完整的双链产物,依此为模板进行PCR扩增即可得到目标基因,也可以直接使用带有切刻的DNA双链作为模板进行PCR扩增。 2 基于逐渐延伸的step by step法 这种方法仅最后一条引物...
DNA
复制中为什么会有冈崎片段?
答:
DNA合成方向和复制叉移动方向相同,可以连续复制,而在另一条模板链上,DNA合成方向和复制叉移动方向却是相反的,必须在引物酶的作用下,先合成一段引物,在
DNA聚合酶
Ⅲ的作用下,在引物RNA的3'端合成一段一段1至2kb的冈崎片段,然后由DNA聚合酶Ⅰ切除引物,相邻的片段之间的缺刻最后由连接酶封闭,...
DNA
测序的测序技术
答:
测序
原理
和技术不同等,主要有以下几种:大规模平行签名测序(Massively Parallel Signature Sequencing, MPSS)、
聚合酶
克隆(Polony Sequencing)、454焦磷酸测序(454 pyrosequencing)、Illumina (Solexa) sequencing、ABI SOLiD sequencing、离子半导体测序(Ion semiconductor sequencing)、
DNA
纳米球测序 (DNA nanoball sequencing...
为什么基因重组不可以少工具
酶
?
答:
酶 主要用途 限制性核酸内切酶 识别DNA特定序列,切断DNA链
DNA聚合酶
Ⅰ 或其大片段(Klenow)①缺口平移制作标记DNA探针 ②合成cDNA的第二链 ③填补双链DNA3’凹端 ④DNA序列分析 耐热DNA聚合酶(Taq DNA聚合酶等) 聚合酶链反应(PCR)DNA连接酶 连接两个DNA分子或片段 多核苷酸激酶 催化多核苷酸5...
DNA
复制时,为什么要连接
酶
答:
而dna本身的两条链又是反向分布的 所以就造成了只有一条链合成可以连续地进行下去(以它为模板的子链生成方向正好是
dna聚合酶
可以直接提供的)而后随链要盘绕成回环 反扭过来 才能合成 再合成起始的时候 dna聚合酶是需要一段rna引物的 在原核生物中这一引物是由dnaq(一种酶)在已解旋的单链5'-3...
PCR-RF-SSCP
的原理
?
答:
其基本
原理
是: RNA有着更多精细的二级和三级构象,这些构象对单个碱基的突变很敏感,从而提高 了检出率,其突变检出率可达90%以上.另外,RNA不易结合成双链,因此可以较大量 的进行电泳,有利于用溴化乙锭染色.但该方法增加了一个反转录过程;还需要一个较 长的引物,内含有启动RNA
聚合酶的
启动序列,从...
1
2
3
4
5
涓嬩竴椤
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