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蛋白免疫共沉淀
免疫共沉淀
的优点
答:
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)
是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法
。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀...
免疫共沉淀
和GST pull down技术各有何优势?
答:
一、免疫共沉淀是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法
。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。二、当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉...
免疫共沉淀
时
蛋白
浓度至少要达到多少
答:
免疫共沉淀时蛋白浓度至少要达到10微克每微升
免疫共沉淀时用Bradford法做蛋白标准曲线,测定蛋白浓度,测前将总蛋白至少稀释1比10倍以上,以减少细胞裂解液中去垢剂的影响 用PBS将总蛋白稀释到约1微克每微升,以降低裂解液中去垢剂的浓度,如果兴趣蛋白在细胞中含量较低,则总蛋白浓度应该稍高(如10微克...
免疫共沉淀
的缺点
答:
免疫共沉淀的缺点:(1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用
;(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;(3)必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若预测不正确,实验就得不到结果,方法本身具有冒险性。(4)灵敏度没有亲和...
CircRNA
免疫共沉淀
实验的流程介绍?
答:
免疫共沉淀:将裂解后的细胞提取物与特异性circRNA抗体预先结合,形成免疫复合物
。通过旋转或摇床等方式,将免疫复合物与蛋白A/G琼脂糖磁珠(或亲和剂)结合,使抗体与目标circRNA结合的复合物以及相关的蛋白一同结合到琼脂糖磁珠上。洗涤:使用洗涤缓冲液洗涤琼脂糖磁珠,去除非特异性结合的细胞蛋白。土豆酶...
请教做过
免疫共沉淀
的高手们谈谈该方法和用途
答:
飞秒检测发现免疫共沉淀是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的
用于研究蛋白质相互作用的经典方法
。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫...
免疫沉淀
法的类型
答:
IP):用来分离某个细胞萃取物中的已知特定
蛋白质免疫共沉淀
法(Co-IP):研究整个蛋白质复合体染色质免疫沉淀法(ChIP):用来研究DNA上的特定蛋白质RNA免疫沉淀法(RIP):和ChIP相近,但RNA免疫沉淀法是用来研究会与RNA结合的蛋白质RIP技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA结合蛋白免疫沉淀),...
免疫共沉淀
检测
蛋白
互作的原理和实验操作是什么?
答:
免疫共沉淀
(Co-Immunoprecipitation,简称Co-IP),是一项经典的生物学技术,它基于抗体与抗原之间精确的特异性结合,为我们揭示细胞内
蛋白质
间的相互作用提供了一把金钥匙。这项技术的核心原理是,通过将预先固定在琼脂糖珠子上的抗体(通常是蛋白质A的抗体)引入细胞或组织中,那些与A蛋白紧密结合的蛋白...
我现在要做
免疫共沉淀
检测
蛋白质
与蛋白质之间的相互作用,我是个新手...
答:
洗脱,可以用
蛋白
电泳上样缓冲液将beads上的抗体,蛋白,蛋白结合蛋白一起洗下来 电泳 WB检测 之所以叫
免疫沉淀
,是因为利用了抗体的亲和力,所以叫免疫,而沉淀的意思就是指,抗体挂到beads上,液体里面的物质用固相的beads可以分离出来,所以叫做沉淀。而上面的7个步骤又会根据实际试验的情况发生变化。
免疫共沉淀
和GST pull down技术各有何优势
答:
免疫共沉淀的话蛋白质是处于天然状态
,蛋白质的相互作用可以在天然状态下进行,可以避免认为影响,还可以分离得到天然状态下相互作用的蛋白复合体。但是问题是两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;而且必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,如果抗体选错了就...
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