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菌的OD值摇过了加IPTG
史上最离奇
的OD
回长事件
答:
1.工程菌的问题
,可能携带的质粒已经丢失,工程菌不具有抗性,建议在诱导前先检测一下质粒稳定性.2.活化诱导时加入的抗生素过低未加或失效,扩大培养时加入抗生素又过量,建议重新配制抗生素,这条也比较勉强。3.加入的IPTG浓度过高.4.培养基的问题,营养不足. ,这条不会!5.噬菌体污染,导致菌体降解...
加iptg
诱导与不加iptg诱导摇相同时间细
菌od值
一样吗
答:
一般是将
菌摇
到OD600=0.4-0.6,然后
加入
终浓度1mM
的IPTG
(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻。
诱导蛋白表达为什么
od值
到0.4才能加诱导剂
答:
一般是将
菌摇
到OD600=0.4-0.6,然后
加入
终浓度1mM
的IPTG
(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻。
如何以大肠
杆菌
表达系统克隆并表达一个编码动物激素的基因?实验设计题...
答:
再挑单菌落,摇个种子液,在结种,培养到合适
的OD值
后,
加IPTG
诱导,再培养段时间(约2-4小时),离心收集
菌
体,PBS悬浮,超声波破碎,离心,沉淀和上清分别电泳(同时还得加个对照,如没有诱导过的),
细胞生物学:电转化流程
答:
8. 取20ul转化产物加160ulSOC涂板,放于37℃温室,过夜培养,次日查看转化结果。其余
菌
液加1:1的30%的甘油后混匀-80℃保存。注:每块加有Amp的平板上均匀涂有X-Gal 80μl ,SOC 80μl,
IPTG
20 μl.四、电击杯清洗流程 1.
用
清水将电击杯稍冲一下。2.向电击杯中
加入
的75%酒精浸泡2hr...
如何检测细菌是否感染噬菌体
答:
噬菌体有烈性的和非烈性噬菌体。烈性的噬菌体侵染细菌后会快速造成细
菌菌
体裂解,培养液呈现清凉透明有破碎残渣。非裂解性的可以铺顶层琼脂板(可以查阅噬菌体滴度的测试实验方案),培养后看顶层琼脂层中有没有噬菌斑,也可以在底层培养基中加些
IPTG
/X-gal若噬菌体带有lacZ的还有蓝白斑筛选的作用(如...
常用感受态细胞制备方法有哪些?
答:
1. 所
用
器具一定要清洁;2. 操作步骤2 中培养基的装量也是很重要的,建议装量不要高于此值:500ml 锥形 瓶装100ml培养基,250ml锥形瓶装50ml培养基;3. 在收获
菌
体前半小时还可以在培养基中
加入
20mM的MgCl2 ,效果会更好一些; 4. 为保证细胞处于对数生长期,培养后的菌体
的OD值
不要高于0....
蛋白表达后sdspage胶 实验组和对照组在目标位置都有条带 且深浅差不...
答:
菌
体破碎之后跑胶,对照和实验组你说的是上清还是沉淀?还有会不会你的蛋白抑菌效果很显著,微量就可以抑菌,所以细菌表达了一点点就死了,所以跑胶看不出差异。
不同细菌感受态制备方式相同吗
答:
1. 所
用
器具一定要清洁;2. 操作步骤2 中培养基的装量也是很重要的,建议装量不要高于此值:500ml 锥形 瓶装100ml培养基,250ml锥形瓶装50ml培养基;3. 在收获
菌
体前半小时还可以在培养基中
加入
20mM的MgCl2 ,效果会更好一些; 4. 为保证细胞处于对数生长期,培养后的菌体
的OD值
不要高于0....
感受态细胞的制备时有什么注意事项
答:
方法一:细菌转化的方法多以Mendel和Higa(1970)的发现为基础,其基本方法是
用
冰预冷的CaCl2或多种2价阳离子等处理细菌,使之进入感受态得以转化。用CaCl2制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞,常用于成批制备感受态细菌。本法适用于大多数大肠
杆菌菌
株,且迅速、重复性好。操作过程简述如下。1.从37℃...
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