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聚合酶链反应过程中需要的酶
催化
聚合酶链式反应的酶
是()
答:
正确答案:
TaqDNA聚合酶
聚合酶链式反应的
五个必备条件是什么?
答:
2、酶一般是DNA水解酶和DNA聚合酶
,DNA水解酶用于切断磷酸二酯键的酶,这些酶使糖磷酸酯主链上的磷酸二酯键水解。3、模板即扩增用的DNA,可以是任何来源,但有两个原则,第一纯度必须较高,第二浓度不能太高以免抑制 4、在PCR反应中,使用低dNTP浓度,可减少非靶位置启动和延伸时的核苷酸错误掺入。
聚合酶链反应的
反应体系
答:
在一个典型的PCR反应体系中需加入:适宜的缓冲液、微量的模板DNA、4×dNTPs、耐热性多聚酶、Mg2 和两个合成的DNA引物
。模板DNa 94℃变性1min,引物与模板40~60℃退火1min,72℃延伸2min。在首次循环前模板预变性3~5min;在末次循环后,样品仍需继续延伸3~5min以上,确保扩增的DNA为双链DNA。为便于了解PCR反应...
聚合酶链反应
是什么?
答:
聚合酶链反应(PCR)的基本原理是一种酶促合成反应
。即在模板DNA、引物和脱氧核糖核苷酸存在下,在DNA聚合酶的作用下,使DNA链扩增延伸。试验先通过加热变性,使DNA双螺旋的氢链断裂,解离成单链DNA;然后通过退火,突然降温使引物与其互补的模板在局部形成杂交链;然后再在DNA聚合酶、脱氧核糖核苷三磷酸...
什么是DNA
聚合酶
?
答:
DNA聚合酶有DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三类
。基因工程中很多步骤都需要DNA聚合酶催化DNA体外合成反应,这些酶作用时大多都需要模板,合成产物的序列与模板互补。基因工程常用的DNA聚合酶有:①大肠杆菌聚合酶Ⅰ(全酶);②大肠杆菌聚合酶Ⅰ大片段(Klenow片段);③T4噬菌体DNA聚合酶;④T7噬菌体聚合酶及经修饰的...
聚合酶链式反应
是怎么回事
答:
Taq DNA
聚合酶
2.5 μl Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水 100 μl PCR
反应
五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即: 引物(PCR引物为DNA片段,细胞内DNA复制的引物为一段RNA
链
)、酶、dNTP、模板和缓冲液(其中需要Mg2+)。 引物有多种设计方法,与PCR在实验中的目的决定。但基本原则相同 PCR所用
的酶
主要有两种...
聚合酶链式反应
简介
答:
聚合酶链反应
(polymerase chain reaction,PCR)是指由引物选择性体外扩增DNA或RNA片段的检测方法[1]。该方法在输血领域可用于各种血型分型、骨髓移植配型、输血传播疾病病原体检测等[1]。
聚合酶链式反应
是体外酶促合成特异DNA片段的一种分子生物学实验方法,主要由高温变性、低温退火和适温延伸三个
步骤
反复的热循环构...
简述
聚合酶链式反应
(PCR)的原理和具体
过程
.
答:
过程
只要记住 1.DNA变性(90℃-96℃):双
链
DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA 2.退火(25℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链.3.延伸(70℃-75℃):在Taq
酶
(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′端→3′端延伸,合成与模板互补的DNA链.还有...
聚合酶的聚合酶
-特性
答:
反应
式为32P32Pi dNPPP←dNP32P32P PPi→DNA最后两种作用,都要求有较高浓度的PPi,因此,在体内由于没有足够高的PPi而无重要意义。DNApolⅠ的DNA
聚合酶
活性和5'→3'外切酶活性协同作用,可以使DNA链上的切口向前推进,即没有新的DNA合成,只有核苷酸的交换。这种反应叫缺口平移(Nicktranslation)。当...
聚合酶链式反应的
反应准备
答:
PCR
反应
五要素:参加PCR反应的物质主要有五种即:引物(PCR引物为DNA片段,细胞内DNA复制的引物为一段RNA
链
)、酶、dNTP、模板和缓冲液(其中需要Mg2+)。引物有多种设计方法,由PCR在实验中的目的决定,但基本原则相同。PCR所用
的酶
主要有两种来源:Taq和Pfu,分别来自两种不同的噬热菌。其中Taq扩增...
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