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组织蛋白上样量为多少
100ul加6ul的
上样
缓冲液可以吗
答:
100ul可以加6ul的上样缓冲液
,因为6ul上样缓冲液,上样的蛋白量会多一些。用2ul还是用6ul的上样缓冲液取决于你的蛋白浓度。因为每孔最多加到25ul,如果你的蛋白是从细胞中提取,而目的蛋白表达又比较少。如果你是组织蛋白,就可以用2ul缓冲液,把上样蛋白量控制在50ul以内,这样跑出来的电泳带会...
求助 关于
上样量
答:
>这要根据你做的蛋白表达量多少,
一般是用DAB显色要50-100μg,用ecl曝光上样量为20-40μg
。但根据你蛋白表达量的不同目标蛋白绝对量DAB法至少50pg,ecl法至少20pg。我也用组织作过western,蛋白浓度的确很高。通常我上50-100ug,足够了。
培养皿的细胞
蛋白量
答:
20-30μg
。根据蛋白质印迹实验,培养皿中的细胞裂解物或组织匀浆的总蛋白的上样量为20-30μg。培养皿是一种用于微生物或细胞培养的实验室器皿,由一个平面圆盘状的底和一个盖组成,一般用玻璃或塑料制成。
肝脏
组织蛋白
裂解
答:
昨天的样品,一起做了标曲之后,
终于在100ug上样量的情况下,也不会超过20ul
,可以用1.0mm的胶板配15孔胶了。我此次大概是取了两片小肝叶的大小的组织进行匀浆。组织蛋白样品制备的详细步骤:准备匀浆管,加珠子;(下次可以多加四五个小珠子,约七八个)将1*SDS lysis buffer加入管中,做好标记...
western
上样量
差距大
答:
western
上样量
差距大原因是提的
蛋白
不是一批测的浓度。某些
组织
细胞中,由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高,不适合做内参。GAPDH即甘油醛-3-磷酸脱氢酶,是参与糖酵解的一种关键酶,催化糖酵解的第六步,还参与核转录等事件,核糖核酸转录、DNA复制和修复以及细胞凋亡。由4个30-40kDa的...
western blot 的内参不一致,急求助
答:
我们知道,要用Western Blot比较不同条件下或者不同
组织
中,目的
蛋白
表达量的相对多少,前提条件是等量的细胞上样,才有比较的基础,特别表达量不高时,
上样量
的差别就很可能影响结果的分析,所以需要内参。在国外发表的文章中,Western Blotting 实验结果须进行内参校正已成为一种惯例。但是,国内仍有不少科研人员在Western ...
目前常用的植物
蛋白
提取方法有哪些?
答:
您好。一、植物
组织蛋白
质提取方法 1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清液,样品制备完成。蛋白质提取...
做实验 | 做好这几步,分分钟成为WB达人!
答:
组织蛋白
提取:研磨组织,加入裂解液,冰上放置并间歇搅拌,离心后测定浓度,同样加loading buffer处理。使用BCA法测定蛋白浓度,设计合理的
上样量
和顺序,确保无处理、对照和处理的上样量均衡。电泳和转膜是WB的核心环节:电泳时,确保玻璃板清洁,胶的配制和灌注要精确,上样技巧和电压时间控制要到位。
Western Blot为什么必须要用内参
答:
内参是最容易被忽略的一项。我们知道,要用Western Blot比较不同条件下或者不同
组织
中,目的
蛋白
表达量的相对多少,前提条件是等量的细胞上样,才有比较的基础。特别表达量不高时,
上样量
的差别就很可能影响结果的分析。所以你需要内参。内参即是内部参照(Internal Control),对于哺乳动物细胞表达来说一般...
Western Blot为什么必须要用内参
答:
所以,严谨的Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系,对实验结果分析是非常有用。特别是当实验出现问题时,借助参照体系很容易就可以查出问题所在。要用Western Blot比较不同条件下或者不同
组织
中,目的
蛋白
表达量的相对多少,前提条件是等量的细胞上样,才有比较的基础。特别表达量不高时,
上样量
误差...
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