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如何检测可溶性蛋白
可溶性蛋白质
含量的测定
答:
可溶性蛋白质含量的测定:进行测定时,加Folin—酚试剂时要特别小心,因为该试剂仅在酸性pH条件下稳定
,但上述还原反应只在pH=10的情况下发生,当Folin一酚试剂加到碱性的铜—蛋白质溶液中时,必须立即混匀,以便在磷钼酸—磷钨酸试剂被破坏之前,还原反应即能发生。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色...
可溶性蛋白质
含量的测定
答:
检测
原理:考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blueG-250)测定
蛋白质
含量属于染料结合法的一种。该染料在游离状态下呈红色,在稀酸溶液中当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,前者最大光吸收在465nm,后者在595nm在一定蛋白质浓度范围内(1-1000μg)),蛋白质与色素结合物在595nm波长下的吸光度与...
怎么
鉴别
可溶性蛋白质
答:
取样品澄清液2毫升,先加入1毫升0.1克/毫升的氢氧化钠溶液,振荡后加入4滴0.01克/毫升的硫酸铜溶液并振荡,
如变紫色,就说明含可溶性蛋白质
,否则不含
测定植物体内
可溶性蛋白质
含量的方法有哪些?
答:
双缩脲法;Folin-酚试剂法;考马斯亮蓝法;紫外吸收法
;具体可参考植物生理生化实验原理和技术这本书。
关于
可溶性蛋白质
的提取和鉴定
答:
提取的话看你要提取的蛋白的性质进行选择。
有电泳,盐析,HPLC。提取后纯化该蛋白,可以采用凝胶柱进行分离,然后进行SDS-page,确定分子量大小
,还可以进行蛋白测序。然后可以
通过X光衍射确定蛋白结构
。具体蛋白质生物功能测定法举例:1
淀粉酶目的基因的鉴定
:淀粉酶能将淀粉水解为多糖或单糖。将难溶淀粉酶能...
福林酚法
检测可溶性蛋白质
的原理
答:
包括两步反应:(1)在碱性条件下,
蛋白质
与铜作用生成蛋白质—铜络合物。(2)此络合物将试剂磷钼酸—磷钨酸(FolIn试剂)还原,混合物深蓝色(磷钼蓝和磷钨蓝混合物),颜色深浅与蛋白质含量成正比。此方法操作简便,灵敏度比双缩脲法高100倍,定量范围为5~100μg蛋白质。FolIn试剂显色反应由酪...
如何
对细胞内
可溶性蛋白质
进行蛋白组分析
答:
裂解细胞,高速离心去除沉淀,取上清跑等电聚焦-SDS双向电泳,银染。然后切割样点,做质谱分析。或者直接去细胞裂解上清液做高通量质谱分析。
设计性实验:植物组织内
可溶性蛋白质
的提取和含量测定
答:
本试剂采用优化的试剂和程序,快速有效提取多种植物中的
可溶性
和疏水性蛋白成分,有效去除植物组织所含的多酚、多糖、醌、色素、脂质、次生代谢物质等干扰
蛋白质
研究的成分,使提取的蛋白质处于最佳的活性状态和
检测
状态,适应于酶学活性测定,单向及双向蛋白电泳,Western Blot和免疫共沉淀分析等蛋白质研究实验...
可溶性蛋白
测定用什么缓冲液,用的是考马斯亮蓝法,急急急急!!!具体怎 ...
答:
常规用PBS或Tris-HCl都可,其实要求不是这么严格,如果害怕缓冲溶液有影响,单独做个缓冲溶液的阴性对照就行了啊,用水溶最简单。
福林酚比色法原理
答:
原理蛋白质与福林(Folin)-酚试剂反应,产生蓝色复合物。作用机理主要是蛋白质中的肽键与碱性铜盐产生双缩脲反应,同时也由于蛋白质中存在的酪氨酸与色氨酸同磷钼酸-磷钨酸试剂反应产生颜色。呈色强度与蛋白质含量成正比,是
检测可溶性蛋白质
含量最灵敏的经典方法之一。此法的显色原理与双缩脲方法是相同...
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