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外源基因真核表达载体的构建
请教一下
基因表达载体构建
的原理和操作步骤
答:
大概步骤:1)从
基因
组或cDNA上克隆得到完整的目的基因(至少包含CDS区),通常在两端加粘性末端或重组位点 2)选择合适的
表达载体
(
真核
、原核、噬菌体、某些病毒、标记等)3)将克隆得到的目的基因与载体连接 4)将重组载体通过某种手段转入受体,即宿主中(化学转染、脂质体、电转、显微操作等)5)筛...
简述转
基因的
基本流程
答:
1.
基因表达载体的构建
旨在使目的基因在受体细胞中稳定存在并表达。2. 载体由目的基因、启动子、终止子和标记基因组成。启动子是RNA聚合酶识别的部位,终止子位于基因尾端,标记基因用于筛选含有目的基因的细胞。第三步:导入目的基因至受体细胞 1. 转化是目的基因进入受体细胞并稳定表达的过程。2. 导入...
如何
构建载体
答:
载体
构建目的 ①用它作为运载工具,将目的
基因
转移到宿主细胞中去。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。理想的运载体是质粒(plasmid),在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。具体过程详解如下图所示:
『分子克隆_
载体构建
』载体介绍
答:
载体元件详解关键元件如复制起始点Ori,是启动复制的指令,原核载体通常只有一个,而
真核载体
则有多个。抗生素抗性基因是筛选工具,如原核的Ampr、Cmr和Kanr,以及
真核的
Puro、Neo和Hygr。多克隆位点则是
外源基因的
灵活插槽,大小和稳定性影响转化效率。每个载体都有自己独特的启动子(P)、增强子(E)和...
如何利用慢病毒
载体构建
稳定
表达外源基因的
细胞系不
答:
真核表达载体
包括腺病毒载体和慢病毒载体,在真核细胞内用于表达目的蛋白的载体都可以叫做真核载体。 腺病毒载体携带
外源基因
较大,可瞬时高表达。 慢病毒载体携带外源基因较小些,但可以重组入细胞基因组,稳定高表达。1.将外源基因插入慢病毒载体 2.将
构建
完成的载体与慢病毒包装质粒混合,共转染靶细胞...
基因表达载体的构建
需要哪些工具酶
答:
基因表达载体的构建
(即目的基因与运载体结合)是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心。其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够表达和发挥作用。过程:首先要用一定的限制酶切割质粒,使质粒出现一个缺口,露出黏性末端。然后用同 一种限制酶切断...
真核表达载体
有哪些
答:
真核表达载体
包括以下几种:1. 质粒载体 质粒是真核生物中常见的基因表达载体。它们可以在真核细胞中自主复制,并能稳定地携带
外源基因
。质粒载体通常具有多个克隆位点,可以插入目的基因片段,并通过特定的调控元件实现
基因的
表达。此外,质粒载体还具备较高的转化效率和表达水平。2. 病毒载体 病毒载体在真...
转
基因
医疗中常用的
载体
主要有哪些
答:
利用噬菌体作
载体
,主要是将外来目的DNA替代或插入中段序列,使其随左右臂一起包装成噬菌体,去感染大肠杆菌,并随噬菌体的溶菌繁殖而繁殖。3、病毒载体 质粒和噬菌体载体只能在细菌中繁殖,不能满足
真核
DNA重组需要。感染动物的病毒可改造用作动物细胞的载体。由于动物细胞的培养和操作较复杂、花费也较多...
将
外源基因
导入原核细胞或
真核
细胞分别有哪些方法?
答:
利用氯哇抑制溶酶体酶或腺病毒与内吞小泡相融合而将其破坏释放出外源DNA,可提高转化效率。3 生物学方法 主要通过
构建
病毒
载体
来完成。3.1 逆转录病毒(retrovirus,Rv):构建简单,装载
外源基因
容量最大达8kb,整合入宿主细胞基因组而无病毒蛋白
表达
。但仅能感染分裂期细胞,体外制备滴度较低,且其随机...
求助:
真核
还是原
核表达
答:
真核表达
通常依赖于宿主细胞的识别元件,如启动子和终止子,可能还需要增强子。
载体
在真核中以质粒形式存在,可复制,但哺乳动物细胞中没有质粒,
外源基因
通常整合到基因组,不能扩增,形成多拷贝。而原核表达则通过直接转化细菌,利用ISPG诱导,蛋白以包涵体或分泌形式存在,可能缺乏真核基因的完整修饰,但...
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