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克隆目的基因的策略
从生物体
克隆目的基因的
方法有哪些?
答:
PCR扩增克隆法是在已知植物基因序列的基础上,进行基因序列克隆的一种方法
。先从基因文库(genebank)中找到有关基因序列,据此合成一对寡聚核苷酸引物,从植物中提取染色体DNA或RNA,进行PCR扩增。扩增的片段纯化后插入合适的质粒载体上,用酶切分析和序列分析检测重组子,并与已知基因序列比较,以获得目的基...
基因克隆的
方法主要有哪几种?简述各种方法的原理和用途。
答:
基本原理:利用入噬菌体进行位点特异性DNA片段重组,通过整合与切出反应,实现基因快速克隆和载体间平行转移
。用途:为大规模克隆基因组注释的可译框架提供了保障。(4)基因的图位克隆 基本原理:首先,通过构建遗传连锁图,将目的基因定位到某染色体的特定位点,并在其两侧确定紧密连锁的RFLP或RAPD分子标记。
基因克隆的
方法主要有哪几种?简述各种方法的原理和用途。
答:
(3)
Gateway大规模克隆技术:基于位点特异性DNA片段重组,通过整合与切出反应,实现基因的快速克隆和平行转移
。该技术保障了大规模克隆基因组和注释的可译框架。(4)图位克隆:首先定位目的基因到染色体的特定位置,然后通过染色体步移技术克隆位于两个紧密连锁标记之间的基因片段。后续通过基因功能互作原理来鉴...
怎样
克隆
一个
目的基因
?
答:
目的基因的克隆是
利用一个单一的基因副本的行为
。
有pcr方法,凝胶电泳方法,色谱法,琼脂糖凝胶电泳法,质粒法等
。具体方法可分别检索文献。常用的植物目的基因克隆技术 1、通过已知基因产物的分析和鉴定 这类技术主要通过生物化学和病理学研究分离鉴定有关基因的蛋白产物,并对蛋白质氨基酸顺序进行分析,推断...
体外
克隆目的基因的
方法
答:
相邻片段的体外克隆目的基因法:(1)
PanhandlePCR法:在限制酶消化的DNA3’端加一个与未知序列上游已知序列互补的单链引物
,从而使经变性后产生的单链DNA分子内聚合,导致己知DNA定位于未知相邻DNA侧翼区段。引物设计是该技术运用的关键所在,所需引物包含-一个与已知序列上游互补的单链引物和两对位于该...
体外
克隆目的基因
方法
答:
体外
克隆目的基因
方法有很多,目前用于获得
目的基因的
方法有几种,如:限制性内切酶、直接分离法、文库筛选法、体外扩增法和人工合成法等,其中限制性内切酶法直接分离目的基因和多聚酶链式反应(PCR),或逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)体外扩增目的DNA片段是目前最常用的方法。将基因组DNA用限制性内切酶...
已知一个物种的基因组,怎么
克隆目的基因
答:
①如果
目的基因
序列是已知的,或部分序列是已知的,探针可以从已有的
克隆
中制备,或用PCR方法扩增。②如果目的基因是未知的,而有其他物种的同源序列,那么可以用同源序列做探针。③如果目的基因未知,但知道它对应的蛋白质序列,可根据蛋白质序列设计相应的核酸探针。2.扣除杂交法:这是一种筛选方法,难度...
基因克隆的
方法有哪些
答:
扩增
目的基因
,比如通过PCR的方法。PCR扩增的序列可以通过酶切或者TOPO TA的方法插入到载体质粒。转染大肠杆菌 筛选阳性
克隆
一般常采用蓝白克隆方法,就是在载体上,序列的插入位置本来是一个完整编码β-gal这个酶的序列,如果不被破坏,产生的酶可以降解细菌培养盘上的底物,形成蓝色产物。如果有目的序列...
如何
克隆
一个
基因
?具体说明
答:
回答:首先要取得
目的基因
:可用mRNA转录或用限制酶切割DNA! 用PCR技术进行扩增:就是♀冰紫幽精♂所说的! 这样就能
克隆基因
!
基因克隆的
基本步骤有哪些
答:
基因克隆的
基本步骤流程如下:一、目的DNA片段的获得:DNA克隆的第一步是获得包含
目的基因
在内的一群DNA分子,这些DNA分子或来自于目的生物基因组DNA或来自目的细胞mRNA逆转录合成的双链 cDNA分子。由于基因组DNA较大,不利于克隆,因此有必要将其处理成适合克隆的DNA小片段,常用的方法有机械切割和核酸限制...
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